一、實驗簡介

血(xue)管生(sheng)成(cheng)在(zai)(zai)腫(zhong)瘤的(de)(de)發(fa)展轉(zhuan)移過程中起到重要作用。小管形(xing)成(cheng)實驗(yan)是測量在(zai)(zai)體外血(xue)管生(sheng)成(cheng)的(de)(de)一種(zhong)快速(su)的(de)(de)、可(ke)量化(hua)的(de)(de)方法。一般(ban)做的(de)(de)多的(de)(de)是研(yan)究(jiu)內(nei)皮細(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)小管形(xing)成(cheng)。內(nei)皮細(xi)(xi)胞(bao)結合條(tiao)件(jian)培(pei)養基接(jie)種(zhong)于(yu)一定基底上，易形(xing)成(cheng)三(san)維網狀結構。然后通過圖像(xiang)分(fen)析(xi)(xi)軟件(jian)對(dui)小管結果(guo)進行定量分(fen)析(xi)(xi)。

二、實驗(yan)步(bu)驟

1、將24孔(kong)板和1ml的槍(qiang)頭放置冰箱或冰上預冷(leng)20-30min，從-20℃冰(bing)箱中取出Matrigel基質膠，將(jiang)其置于(yu)4℃冰箱待(dai)其(qi)融化。

2、鋪膠：取(qu)250 μl/孔Matrigel基(ji)質膠加入24孔板中，加入(ru)時避(bi)免產生氣泡，置于細胞培養箱中60min待其凝固。

3、加入1ml 含EDTA的胰酶消化細胞(bao)，待消化完全后，加入含血清培養液(ye)終止消化，計數后用培養基重懸細胞(bao)并(bing)調整細胞(bao)密度(du)為2-3×10⁵個(ge)/ml。

4、待(dai)膠凝固后，取出24孔板，每孔加入500μl細(xi)胞(bao)(bao)懸液，做好(hao)標記(ji)后放入細(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)箱常規培養(yang)4-6h。

5、100、200倍顯微鏡下隨機(ji)5個視野(ye)觀察計(ji)數血管內皮細胞小管分枝、小管數、小管長度(du)等。統計(ji)各組間差異。