試劑
PNGase F（不含甘油）P0705S/P0705L
- 貨號:
- P0705S/P0705L
- 規格:
- 15,000 units/15,000 units
- 目錄價:
- ￥1899.00/7539.00
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識別位點
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PNGase F 幾乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有 N-連接糖 [x = H 或寡糖]。
特性
去除糖蛋白的 N-連接糖
更多詳細結構特異性請翻閱目錄257頁
概述
PNGase F 是一種酰胺酶，切割糖蛋白上的 N-連接糖，切割的糖型有：高甘露糖、雜合和復雜寡糖，切割位點為：最內側的 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間。PNGase F 還提供不含甘油的形式，便于在 HPLC 方法中取得最佳效果。
來源
NEB #P0704 和 NEB #P0705 是從腦膜敗血性黃桿菌（Flavobacterium meningosepticum）中提取純化。
NEB #P0708 和 NEB #P0709 克隆自和平空間站伊麗莎菌（Elizabethkingia miricola，formerly Flavobacteriummeningosepticum）并在 E. coli 中高度表達。
反應條件
將糖蛋白于(yu) 1X 糖蛋白變性緩沖(chong)液(ye)（含 0.5% SDS，40mM DTT）中 100℃ 煮沸 10 分(fen)鐘使其變性，再(zai)在(zai)加入1% NP-40 的(de) 1X GlycoBuffer 2 反(fan)應緩沖(chong)液(ye)中，37℃ 溫育進行反(fan)應。熱失活：75℃ 10 分(fen)鐘。
隨酶提供的試劑
10X 糖蛋白變性緩(huan)沖液(ye)
10X GlycoBuffer 2 緩沖液
10% NP-40
分子量
36,000 daltons。
質量保證
無(wu)糖(tang)苷(gan)外切酶污染(ran)，無(wu)糖(tang)苷(gan)內切酶 F1、F2和 F3 活(huo)性(xing)，無(wu)蛋白水解活(huo)性(xing)。
單位定義
1 單位指 10 μl 的反(fan)應(ying)體系(xi)中，37℃ 條(tiao)件(jian)下 1 小時 從 10 μg 變性 RNase B 中除去(qu)超過 95%的碳水化(hua)合物所需(xu)要的酶量（65 NEB units = 1 IUB milliunit）。
濃度
500,000 units/ml。
注意事項
已知 PNGase F 的(de)活(huo)性(xing)受 SDS 的(de)抑制(zhi)，所以在反應混合(he)物(wu)中必須加入 NP-40。要(yao)使天然糖(tang)蛋(dan)白去糖(tang)基化(hua)，建議增加酶量并延長溫育時間。
要使非變性糖蛋白去糖基化，建議增加酶量并延長溫育時間。
參考文獻
有(you)關該產品特性和應用的相關文(wen)獻請登陸 www.neb-china.com，www.neb.com。
