產品簡介

PEI MAX——高產工業化轉染(ran)試(shi)劑(ji)-高度(du)濃縮，可(ke)制備(bei)大量轉染(ran)試(shi)劑(ji)

Polysciences轉染試(shi)劑系列是(shi)基(ji)于聚(ju)乙烯(xi)亞胺（Polyethylenimine，PEI）的(de)(de)產品，因其較高的(de)(de)轉染效果，已廣泛應用(yong)于工業化生產。聚(ju)乙烯(xi)亞胺是(shi)一種具有較高的(de)(de)陽離子(zi)(zi)電荷密度的(de)(de)有機大分子(zi)(zi)，每相隔二個碳(tan)原子(zi)(zi)，即每“第(di)三(san)個原子(zi)(zi)都是(shi)質子(zi)(zi)化的(de)(de)氨基(ji)氮原子(zi)(zi)，使得(de)聚(ju)合物(wu)網絡在任何pH下(xia)都能充當有效的(de)(de)“質子(zi)(zi)海綿”(proton sponge)體。PEI可用(yong)作轉染試(shi)劑，它可以縮聚(ju)DNA分子(zi)(zi)形成顆粒并轉染真核(he)細胞。

PEI MAX 40K是(shi)由Polysciences出品的(de)(de)全合成(cheng)(cheng)線(xian)性聚(ju)乙烯亞(ya)胺瞬(shun)時(shi)轉(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)。PEI MAX是(shi)一款高度(du)濃縮的(de)(de)粉劑(ji)，大量科學家選擇PEI MAX ，在內(nei)部自行制備低成(cheng)(cheng)本高效益的(de)(de)PEI轉(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)。多(duo)年以來，經(jing)過(guo)(guo)眾多(duo)業內(nei)人士評審的(de)(de)公開研究(jiu)和(he)(he)出版文獻表(biao)明，在HEK293、CHO 和(he)(he) Sf9系統中可(ke)獲得很高的(de)(de)轉(zhuan)染(ran)(ran)效率，在重組抗體(ti)和(he)(he)病毒載體(ti)生產(chan)中穩定性高，可(ke)靠(kao)性強(qiang)。PEI MAX 提供從96孔(kong)板到200L生物(wu)反應(ying)器持(chi)續的(de)(de)高基因表(biao)達細(xi)(xi)胞(bao)體(ti)系，實現(xian)從新(xin)藥(yao)研發到工業化(hua)生產(chan)的(de)(de)輕松過(guo)(guo)度(du)。而且與(yu)大多(duo)數細(xi)(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)(ran)方案(an)相比，使用PEI MAX 至少可(ke)降(jiang)低40%轉(zhuan)染(ran)(ran)成(cheng)(cheng)本（部分案(an)例可(ke)降(jiang)低90%轉(zhuan)染(ran)(ran)成(cheng)(cheng)本）。

產品特點(dian)

PEI MAX 40K是線性聚(ju)乙烯(xi)亞(ya)胺鹽(yan)酸(suan)鹽(yan)形式（Linear Polyethylenimine Hydrochloride），是線性化聚(ju)乙烯(xi)亞(ya)胺PEI 25K的(de)升級(ji)產品。相比(bi)于(yu)PEI 25K，PEI MAX 40K ：

1.完全水解（去乙酰(xian)化）；

2.鹽(yan)酸(suan)鹽(yan)形式，具更高(gao)的水(shui)溶特性；

3.含更(geng)長連續性乙烯亞胺片段，其質子(zi)化氮水平比(bi)PEI 25K提高11%以上。

應用(yong)領(ling)域

PEI MAX40K（cat#24765）是一款非(fei)GMP等(deng)級(ji)的PEI轉染試(shi)劑，適用(yong)(yong)于基礎學術研(yan)究(jiu)和藥物研(yan)發早期階段，以固(gu)體(ti)(ti)粉(fen)末形式提供，需用(yong)(yong)戶自行配置（詳情(qing)見使用(yong)(yong)方法）。

客戶體驗

Expression of mAb B72-3, 8 days post-transfection using Gibco Freestyle F17 cell culture media . For more information, see the following publication: Delafosse, L., Xu, P. & Durocher, Y. Comparative study of  polyethylenimines for transient gene expression in mammalian HEK293 and CHO cells. Journal of Biotechnology 227,103–111 (2016). 

PEI MAX粉末配(pei)置方法：

1)將1g PEI MAX 40K放(fang)入盛有(you)900 mL水的(de)玻璃燒杯(bei)中；

2)放(fang)入攪(jiao)拌(ban)轉子，放(fang)置于(yu)磁力攪(jiao)拌(ban)器上(shang)，設置攪(jiao)拌(ban)程序以形成一個較(jiao)小的漩渦；

3)等待PEI MAX 40K完全溶解，通常需要5分鐘左右(you)；

4)用25 mL塑(su)料(liao)移液管加入(ru)1 N氫(qing)氧化鈉滴定至pH 6.9~7.1；

5)如果不(bu)小心(xin)超過7.1，則使用1N的鹽酸和新的塑料移(yi)液管將pH重新滴定(ding)至6.9~7.1；

6)將溶液(ye)轉(zhuan)移到1L玻璃(li)量筒中，加(jia)入水定容至1L；

7)用無菌真空過濾膜過濾配制的轉染試劑溶液；

8)按需分裝，4°C儲存（切記不(bu)可冷凍(dong)）；

注：未經(jing)配制的(de)粉末有效期為2年。

配置成液體后分裝(zhuang)在合適的瓶子中，并且(qie)保存在4℃的轉染試劑將可在6個月之內保持性(xing)能。

如僅用于(yu)蛋白(bai)定性研究(jiu)，分裝的(de)轉(zhuan)染試(shi)劑可延長有效(xiao)使用期至(zhi)1年。

經過馴化的無血(xue)清培養懸浮(fu)細胞轉染流(liu)程

1.準備(bei)工作

 轉染(ran)前 2~3 小時，種植細胞密度為 1X10⁶ /mL 于培養容器中。

2. 轉染(ran)步(bu)驟(zou)（以 250mL 搖瓶為例(li)，轉(zhuan)染(ran)前(qian)種植細胞總體積為 25mL，最(zui)終總培養體積為 50mL）

準(zhun)備(bei) PEI-DNA 轉染混合物（以下操作(zuo)順序(xu)尤為(wei)關鍵）。

1)在含有2.5mL（25mL的10%）稀釋液的聚丙烯EP管中加入 50ug 質粒 DNA（質粒用量建議在 1~2ug/10⁶ 細胞之間優化，此處使用 2ug/10⁶ 細胞）；

2) 輕(qing)輕(qing)地混勻/振蕩(dang)溶液(ye)；

3) 在(zai) DNA 溶液中加入 50~200uL PEI 轉染試劑(ji)（PEI/DNA 的(de)比例建議在(zai) 1~4：1之間優化，首次推薦使用 2：1 或 3：1）；

4) 渦(wo)旋振蕩 5 秒鐘；

5) 將管子靜置于超凈工作臺 10~15 分鐘，使 PEI-DNA 復合物形成（共孵育時間建議不超過 20 分鐘）；

6) 用移液(ye)器(qi)輕輕上(shang)下吹(chui)打混合液(ye) 3 次；

注：邊晃(huang)動搖(yao)瓶，邊將 PEI-DNA 混合液加入更(geng)換(huan)了培(pei)養(yang)基(ji)的轉染孔中，確保 PEI-DNA 復合物均勻分布，防止(zhi)局部濃度過高(gao)。

3. 孵(fu)育培養

將細胞培(pei)養瓶放(fang)入(ru)培(pei)養箱，搖(yao)瓶培(pei)養 2~3 小時后，加入25mL新鮮培養基，繼續培養。

通常，在(zai)轉染(ran)后36-48小時可檢測到重組蛋白表達或包裝的病毒顆粒。轉染后72-96小時可觀察到最大產量。

含血清(qing)培(pei)養的貼壁細胞轉(zhuan)染流程

1. 準備工作(zuo)

? 轉染(ran)前18~24小時細胞鋪板。

? 在(zai)培養基中加入(ru)合適數量的(de)細胞(bao)(bao)，以確保在(zai)轉染前(qian)形成 60~80%匯合度的(de)單細胞(bao)(bao)層，此為最理(li)想的(de)細胞(bao)(bao)轉染密度。

2. 轉染步驟（以 6 孔板單孔舉例）

? 轉染前 1~2 小時，將需要轉染的孔中的培養基替換成 3mL 新鮮的含有2%低血清或無血清的培養基。（高(gao)濃(nong)度血清抑制PEI的(de)性(xing)能，大多數情況下，較(jiao)低的(de)血清含量(≤ 5%)或無血清將獲得較(jiao)高(gao)的(de)轉染效率）。

? 準備 PEI-DNA 轉染混合物（以下操作(zuo)順(shun)序(xu)尤為(wei)關鍵）。

1) 在含有(you)300uL（3mL的(de)10%）稀釋液的(de)聚(ju)丙烯 EP 管中加入2ug質(zhi)粒 DNA；

2) 輕輕地混勻(yun)/振蕩溶液；

3) 在(zai)(zai) DNA 溶液中加入 2~8 uL PEI 轉染試(shi)劑（PEI-DNA 的比例建議(yi)在(zai)(zai) 1~4：1 之間優(you)化，首次推薦使用 2：1 或 3：1）；

4) 渦(wo)旋振蕩 5 秒鐘；

5) 將管(guan)子靜置于超凈工(gong)作臺 10~15 分(fen)鐘，使 PEI-DNA 復(fu)合物形成（建議(yi)共孵育時間不超過 20 分(fen)鐘）；

6) 用移液器輕輕上下吹打混(hun)合液 3 次

? 邊(bian)晃動細胞培養板(ban)，邊(bian)將 PEI-DNA 混合液(ye)加入更換(huan)了(le)培養基(ji)的轉染孔(kong)中，確保 PEI-DNA 復合物(wu)均勻分布，防止(zhi)局部濃度過高(gao)。

3. 孵育培(pei)養(yang)

  ? 將(jiang)細(xi)胞培養(yang)(yang)板放入培養(yang)(yang)箱(xiang)培養(yang)(yang) 18~24（請注意，此處并非(fei)常規(gui)lipo脂質體轉染的(de) 4 小時(shi)后(hou)換液）小時(shi)后(hou)，更換含有血清的(de)正(zheng)常培養(yang)(yang)基；

  ? 通(tong)常，在轉染后(hou)(hou) 36-48 小時可檢測到(dao)重組蛋白表達(da)或包(bao)裝的病毒(du)顆(ke)粒(li)，轉染后(hou)(hou) 72-96 小時可觀察到(dao)最大產(chan)量(liang)。