產品簡介

Transporter 5轉(zhuan)染試劑是一種(zhong)非GMP等級的即用型線性聚(ju)乙烯亞胺(an)（PEI轉染試劑）溶液，由PEI MAX配置而成，采用0.1um PES無菌過濾器，完全消除支原體污染風險。Transporter 5將DNA縮聚成帶正電荷的復合物，這些復合物很容易通過內吞作用進入細胞，并且(qie)Transporter 5-DNA 復合物能很好地抵御溶酶體的降解作用，有效提高轉染效率。適用于工藝開發、臨床前和早期臨床研究，可無縫過渡到MAXgene GMP用于商業化(hua)生(sheng)產。

Transporter 5轉染試劑能高效地將DNA轉染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲（SF9、SF21） 等真核細胞系，可作用于大到(dao)135,000個核苷酸的質粒，所以較大的質粒也可以成功地轉染。 

Transporter 5可(ke)(ke)節省試劑(ji)準備時間，加快項目進(jin)度(du)。經(jing)過(guo)嚴格(ge)的(de)性能檢測，確(que)保(bao)品質，在新藥研發過(guo)程中是一款快速(su)、重復性好、可(ke)(ke)用于批量(liang)產(chan)的(de)轉(zhuan)染試劑(ji)。

產品(pin)特點

l非GMP，研究級(ji)PEI轉染試(shi)劑溶液

l高轉染效率

l無縫過渡到MAXgene GMP

l易放大，可預測產量

l用于工藝開發，臨床前和早期臨床研究

轉染示意圖

含血(xue)清培養的貼壁細胞(bao)轉(zhuan)染流程

1. 準備工作(zuo)

? 轉染前(qian) 18~24 小時細(xi)胞(bao)鋪板。

? 在培養基中加入合(he)適數量的(de)細胞，以確保在轉染前形成 60~80%匯合(he)度的(de)單細胞層，此為最(zui)理想(xiang)的(de)細胞轉染密度。

各規格培養容器中(zhong)貼壁(bi)細(xi)胞(bao)鋪板密度參考(kao)表(biao)

2. 轉染(ran)步驟（以 6 孔(kong)板單孔(kong)舉例）

? 轉染(ran)(ran)前 1~2 小時，將需要(yao)轉染(ran)(ran)的孔中的培養(yang)基替換成 3 mL 新鮮的含有2%低血清(qing)或(huo)(huo)無血清(qing)的培養(yang)基。（高(gao)濃度(du)血清(qing)抑制 Transporter 5 的性能(neng)，大多數情況下，較低的血清(qing)含量(≤ 5%)或(huo)(huo)無血清(qing)將獲(huo)得較高(gao)的轉染(ran)(ran)效率）。

? 準備Transporter 5-DNA 轉(zhuan)染混合物（以下操作順序尤為關鍵）。

1) 在含有300uL（3mL的10%）稀釋液(ye)的聚(ju)丙(bing)烯 EP 管中(zhong)加入 2ug質粒 DNA；

2) 輕輕地混勻/振蕩溶液；

3) 在 DNA 溶液中加入 2~8 uL Transporter 5 轉染試劑（Transporter 5-DNA 的比例建議在 1~4：1 之間優化，首次推薦使用 2：1 或 3：1）；

4) 渦旋振(zhen)蕩 5 秒(miao)鐘(zhong)；

5) 將管子靜置于超凈工作臺 10~15 分鐘，使 Transporter 5-DNA 復合物形成（建議共孵育時間不超過 20 分鐘）；

6) 用移液器輕(qing)輕(qing)上(shang)下吹打混合液 3 次(ci)

? 邊晃動細胞培養板，邊將 Transporter 5-DNA 混合液加入更換了培養基的轉染孔中，確保 Transporter 5-DNA 復合物均勻分布，防止局部濃度過高。

3. 孵(fu)育培(pei)養

  ? 將細胞培養板放入培養箱培養 18~24小時后，更換(huan)含有(you)血清的正常(chang)培養基；

  ? 通常，在轉(zhuan)染(ran)后(hou) 36-48 小(xiao)時可(ke)(ke)檢測到重組(zu)蛋(dan)白表達或包(bao)裝的(de)病(bing)毒顆粒，轉(zhuan)染(ran)后(hou) 72-96 小(xiao)時可(ke)(ke)觀察到最(zui)大產量。

經過(guo)馴化的無血清培養懸浮細胞轉染(ran)流程

1.準(zhun)備工作

 轉(zhuan)染(ran)前 2~3 小時，種植細胞密度為 1X10⁶ /mL 于培養容器中。

2. 轉染步驟（以 250 mL 搖瓶為(wei)例，轉染前種植細胞總(zong)體(ti)(ti)積(ji)為(wei) 25 mL，最終(zhong)總(zong)培養體(ti)(ti)積(ji)為(wei) 50 mL）

準備(bei) Transporter 5-DNA 轉染混合物（以下操作順序尤為關鍵）。

1)在含有 2.5 mL（25mL 的 10%）稀釋液的聚丙烯 EP 管中加入 50ug 質粒 DNA（質粒用量建議在 1~2ug/106 細胞之間優化，此處使用 2ug/10⁶ 細胞）

2) 輕輕地混勻/振(zhen)蕩溶液

3) 在 DNA 溶液中加入 50~200uL Transporter 5 轉染試劑（Transporter 5/DNA 的比例建議在 1~4：1 之間優化，首次推薦使用 2：1 或 3：1）

4) 渦(wo)旋振蕩 5 秒鐘

5) 將管子靜置于超凈工作臺 10~15 分鐘，使 Transporter 5-DNA 復合物形成（建議共孵育時間不超過 20 分鐘）

6) 用移液器輕(qing)輕(qing)上下吹打(da)混(hun)合(he)液 3 次

注：邊晃動搖瓶，邊將 Transporter 5-DNA 混合液加入更換了培養基的轉染孔中，確保Transporter 5-DNA 復合物均勻分布，防止局部濃度過高。

3. 孵(fu)育培(pei)養

將細胞培(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶放入培(pei)(pei)養(yang)(yang)箱，搖瓶培(pei)(pei)養(yang)(yang) 2~3 小時后，加入 25 mL 新鮮培養基，繼續培養。

通常(chang)，在轉染(ran)后 36-48 小時可檢測到重組蛋白表達或包裝的病毒顆粒。轉染后 72-96 小時可觀察到最大產量。