熒(ying)光原(yuan)位(wei)雜交(jiao)技(ji)術（Fluorescence in situ hybridization，FISH）技(ji)術問世于(yu)20世紀70年代(dai)后期，是(shi)在原(yuan)來的(de)(de)同(tong)位(wei)素原(yuan)位(wei)雜交(jiao)技(ji)術基礎(chu)上發(fa)展起來的(de)(de)，是(shi)一種(zhong)應用非(fei)放射性熒(ying)光物(wu)質依靠核酸(suan)探(tan)針雜交(jiao)原(yuan)理(li)在核中或染色體上顯示核酸(suan)序(xu)列位(wei)置的(de)(de)方法(fa)。
熒光原位雜交技術基本原理是，按照兩個核酸的堿基序列互補原則，用特殊修飾的核苷酸分子標記DNA探針，然后將標記的探針直接原位雜交到染色體或DNA 纖維切片上，再與熒光素分子偶聯的單克隆抗體和探針分子特異性結合，經熒光檢測系統和圖形分析技術對染色體或DNA纖維上的DNA序列定位、定性和相對定量。該技術具有快速，安全，靈敏度高以及探針可長期保存等特點，目前已廣泛應用于細胞遺傳學，腫瘤生物學，基因定位，基因作圖，基因擴增及分子診斷等領域。
熒光原(yuan)位雜交的優勢
1.試劑和探針無放射性，安全可控；
2.探針穩定，可長期保存；
3.特異性好，實驗準確。
4.FISH可定位長度在1kb的DNA序列，其靈敏度與放射性探針相當；
5.多色FISH通過在同一個核中顯示不同的顏色可同時檢測多種序列；
6.既可以在玻片上顯示中期染色體數量或結構的變化，也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結構。
實(shi)驗(yan)流程
FISH樣本的制備→探針的制備→探針標記→雜交→染色體顯帶→熒光顯微鏡檢測→結果分析。
實驗操作
1.設計探針要根據實驗的需要來進行，也就是說你要檢測的目的基因決定你的探針設計。
2.組織切片4～5μm 厚，過厚或過薄的切片均會對信號的強弱產生影響，而且切片應完整，質量良好，否則會在預處理時掉片。載玻片的選擇建議使用防脫載玻片，有條件的實驗室可使用更好的陽離子或者陰離子專用載玻片，可有效防止脫片現象的發生。
3.標本的處理也是關系到最后信號強弱的關鍵，但有些人不注意這些細節，結果造成熒光信號弱，難以分辨。這與預處理不當造成探針難以達到飽和而雜交難以進行有關。
4.這一步是FISH關鍵中的關鍵。變性包括標本變性和探針變性，這兩個步驟關系到FISH的成敗，千萬要嚴格按照操作規程進行，不但如此，特殊標本還要自己摸條件。
5.操作熒光(guang)抗體(ti)的時(shi)(shi)候(hou)千萬要(yao)避光(guang)，否則將前功盡(jin)棄啊。在(zai)(zai)(zai)FISH，就(jiu)是(shi)(shi)使用(yong)熒光(guang)顯微(wei)鏡觀察(cha)(cha)和記錄(lu)結果。在(zai)(zai)(zai)正常情(qing)況(kuang)下，目前商業(ye)化的探針即使是(shi)(shi)雜(za)交(jiao)以后，熒光(guang)信(xin)(xin)號能(neng)(neng)保存半年之久(jiu)。有(you)時(shi)(shi)候(hou)，信(xin)(xin)號也會(hui)急劇(ju)衰(shuai)減(jian)，幾分鐘(zhong)后就(jiu)不見(jian)了。出現這種情(qing)況(kuang)，就(jiu)是(shi)(shi)由于沒有(you)嚴(yan)格避光(guang)。因此在(zai)(zai)(zai)觀察(cha)(cha)和記錄(lu)的時(shi)(shi)候(hou)，要(yao)盡(jin)可(ke)能(neng)(neng)地在(zai)(zai)(zai)暗室里面操作。
結(jie)果交付
1. 原始雜交顯色拍照結果圖片
2. 雜交后的切片，剩余探針等實驗材料
3. 完(wan)整的(de)實驗(yan)報告，包括實驗(yan)過程、所(suo)用儀器試劑、蠟塊玻片和相(xiang)關分(fen)析數據
