細胞(bao)凋亡(wang)(wang)(wang)(wang)是指(zhi)細胞(bao)在(zai)生長(chang)到(dao)一定階(jie)段及某些生理(li)(li)過程(cheng)中，會受到(dao)多因素和機制的(de)(de)嚴格(ge)調控(kong)而進入死亡(wang)(wang)(wang)(wang)。這(zhe)是一個(ge)(ge)動(dong)態(tai)的(de)(de)過程(cheng),會涉及一系列復雜的(de)(de)生化反(fan)應, 是一個(ge)(ge)需要酶(mei)參與(yu)的(de)(de)級聯(lian)(lian)反(fan)應,同時也(ye)涉及不同基因的(de)(de)表達及調控(kong)、信號傳(chuan)導(dao)。其(qi)中有幾項(xiang)生理(li)(li)過程(cheng)能被用來檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)凋亡(wang)(wang)(wang)(wang)的(de)(de)發(fa)生，因此多參數分(fen)(fen)析法對于(yu)準確檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)這(zhe)一過程(cheng)十分(fen)(fen)重要。同時，了解細胞(bao)死亡(wang)(wang)(wang)(wang)和存(cun)活機制也(ye)是毒理(li)(li)分(fen)(fen)析和藥物研(yan)發(fa)應用中一個(ge)(ge)非常關鍵的(de)(de)內(nei)容。 Sigma?聯(lian)(lian)合Roche?提供多種(zhong)分(fen)(fen)析細胞(bao)凋亡(wang)(wang)(wang)(wang)的(de)(de)研(yan)究(jiu)方(fang)法。包括：Caspase活性檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)；DNA片(pian)段化分(fen)(fen)析和檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)；膜變(bian)化檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)（AnnexinV染色、膜電位、線粒體功(gong)能完(wan)整性分(fen)(fen)析檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)實驗）及細胞(bao)形態(tai)學檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)。
Caspase活(huo)性(xing)檢測
Caspase (cysteinyl-aspartic acid proteases)是一個家族的(de)(de)(de)蛋(dan)白酶，它的(de)(de)(de)活(huo)化是細(xi)胞凋(diao)亡(wang)的(de)(de)(de)典型特(te)征。一旦(dan)一個Caspase 酶被(bei)激發(fa)，就會(hui)激活(huo)一系列其他的(de)(de)(de)Caspas酶,裂解相應的(de)(de)(de)胞漿胞核(he)底(di)物，最終(zhong)導(dao)致(zhi)細(xi)胞凋(diao)亡(wang)。Caspase 3 活(huo)化發(fa)生在凋(diao)亡(wang)早(zao)期，并在凋(diao)亡(wang)過程(cheng)中起(qi)重要作用。Caspase 3 Activity Assay (CASP3C) 基于(yu)熒光(guang)免疫酶測定，能在體外特(te)異性(xing)地(di)對Caspase 3進(jin)行(xing)定量(liang)。
膜變化檢測
凋亡(wang)(wang)細(xi)(xi)胞(bao)另一(yi)(yi)個(ge)生(sheng)化特征是細(xi)(xi)胞(bao)膜(mo)內側的磷脂酰絲(si)氨酸(suan)從胞(bao)質(zhi)轉至胞(bao)外。膜(mo)聯蛋白中(zhong)的Annexin V，是一(yi)(yi)種磷脂結(jie)合(he)蛋白，與磷脂酰絲(si)氨酸(suan)有強親和力。通(tong)過使(shi)用(yong)Annexin V FLUOS Staining Kit () 或Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit (APOAF) 方(fang)法進行凋亡(wang)(wang)細(xi)(xi)胞(bao)早(zao)期檢(jian)(jian)測。可使(shi)用(yong)流式細(xi)(xi)胞(bao)儀或熒光顯(xian)微鏡監測。同時使(shi)用(yong)PI，根據細(xi)(xi)胞(bao)膜(mo)的通(tong)透(tou)性區分早(zao)期凋亡(wang)(wang)細(xi)(xi)胞(bao)和壞死細(xi)(xi)胞(bao)。 線粒(li)(li)體(ti)膜(mo)電(dian)位和膜(mo)通(tong)透(tou)性的變化也是凋亡(wang)(wang)細(xi)(xi)胞(bao)一(yi)(yi)個(ge)重要(yao)特點。可使(shi)用(yong)Cytochrome c Oxidase Assay Kit (CYTOCOX1) 試劑盒檢(jian)(jian)測凋亡(wang)(wang)細(xi)(xi)胞(bao)線粒(li)(li)體(ti)所釋(shi)放的細(xi)(xi)胞(bao)色素C。也可使(shi)用(yong)Mitochondria Isolation Kit 1 (MITOISO1) 分離凋亡(wang)(wang)細(xi)(xi)胞(bao)線粒(li)(li)體(ti)，其(qi)膜(mo)電(dian)位可通(tong)過Mitochondrion Membrane Potential Kit (MAK146-1KT) 檢(jian)(jian)測。
DNA片段化分析
DNA降解也是(shi)細(xi)胞凋(diao)亡(wang)的(de)典型(xing)(xing)標志之一(yi),其降解產物可分為兩種(zhong)，即高(gao)分子量(liang)的(de)單(dan)(dan)鏈(lian)DNA缺口以及(ji)(ji)低分子量(liang)DNA片(pian)斷(單(dan)(dan)鏈(lian)及(ji)(ji)寡聚核小(xiao)體)。單(dan)(dan)鏈(lian)DNA缺口有特(te)定的(de)檢測方(fang)法(fa)，即利用酶催化，將特(te)定核酸標記到游離的(de)3'-OH末端，這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)被稱為 TUNEL。Roche提供的(de)基于TUNEL法(fa)的(de)In Situ Cell Death Kit, fluorescein （）能夠在組織(zhi)及(ji)(ji)單(dan)(dan)細(xi)胞中檢測到低水平(ping)的(de)凋(diao)亡(wang)，靈敏度高(gao)，背景(jing)干(gan)擾小(xiao)，且可通過后續的(de)流式、熒(ying)光(guang)顯(xian)微鏡、光(guang)學顯(xian)微鏡檢測對(dui)細(xi)胞凋(diao)亡(wang)進行定量(liang)。 在凋(diao)亡(wang)細(xi)胞的(de)細(xi)胞質中出現的(de)組蛋白(bai)聯合的(de)DNA片(pian)斷(單(dan)(dan)鏈(lian)及(ji)(ji)寡聚小(xiao)體)，可使用Cell Death Detection ELISAPLUS（）高(gao)通量(liang)地檢測細(xi)胞死亡(wang)，或使用Apoptotic DNA-Ladder Kit （）通過純化及(ji)(ji)瓊脂糖電(dian)泳分析這(zhe)些呈現出典型(xing)(xing)的(de)ladder狀(zhuang)態的(de)DNA片(pian)斷。
細胞形態學檢測
細(xi)胞(bao)(bao)形(xing)態(tai)的(de)(de)(de)變化如胞(bao)(bao)膜皺(zhou)摺或(huo)出泡、核染(ran)色質(zhi)致密、胞(bao)(bao)質(zhi)濃縮等，都可作為(wei)細(xi)胞(bao)(bao)凋(diao)(diao)亡的(de)(de)(de)證據(ju)。一般以細(xi)胞(bao)(bao)核染(ran)色質(zhi)的(de)(de)(de)形(xing)態(tai)學(xue)改變為(wei)指標來評判細(xi)胞(bao)(bao)凋(diao)(diao)亡的(de)(de)(de)進展情況(kuang)。常(chang)用(yong)的(de)(de)(de)DNA特(te)異性染(ran)料有(you)：Hoechst 33342 (B2261)，Hoechst 33258 (B2883), DAPI (D9542)。三種染(ran)料與(yu)DNA的(de)(de)(de)結(jie)合是非嵌入式(shi)的(de)(de)(de)，主要結(jie)合在DNA的(de)(de)(de)A-T堿(jian)基區。紫外光(guang)激發時發射明亮的(de)(de)(de)藍色熒光(guang)。
