材料與試劑：
| 全稱 | 簡稱 | 貨號(hao) |
| PBS | —— | |
| 乙醇，70-80%,提前放置-20°C預冷 | 固定劑 | —— |
| BD Pharmingen? stain buffer, or equivalent, 1X PBS, 2% FBS, 0.1% NaN3 (pH 7.1–7.4) | 染色液 | 554656 |
| BD Pharmingen? PI/RNase staining buffer (for PI/Rnase staining) | PI/RNase染色液 | 550825 |
| BD Pharmingen? 7-AAD (7-Amino-Actinomycin D) staining solution (for 7-AAD staining) | 7-AAD染色液 | 559925 |
使用說明：
DNA染料，尤其是PI，具有較(jiao)強的粘性。樣本上機檢測之(zhi)后，應遵照儀器說(shuo)明書仔細清洗流式細胞儀，以免(mian)對下一位操作者(zhe)結果造成影(ying)響 。
固定(ding)好的(de)細(xi)胞可保(bao)存(cun)長達12個月 (儲存(cun)于70-80% 的(de)乙醇，置于 -20°C保(bao)存(cun))。
操作(zuo)步(bu)驟(zou)：
1. 收獲(huo)細胞(bao)于流式(shi)管(guan)中，加入(ru)3-4ml的(de)PBS清洗細胞(bao)。
2. 1000rpm離心(xin)10分鐘，棄上清。
3. 逐(zhu)滴(di)加入5ml或更(geng)多預冷的(de)70-80%的(de)乙醇，渦旋混勻細胞(bao)， 4°C避光過夜（>18小(xiao)時(shi)）。
4. 1000-1500rpm 離(li)心細胞10分鐘，棄上清。之后清洗(xi)細胞2次以去除所有的乙醇(chun)。
注：第一次用1x PBS，第二次用染色液（貨號：554656）。
5. 細胞染(ran)色：每管樣本需10^6細胞。具體操(cao)作如下：
1) 對于(yu)PI/RNase 染色(se)，將細胞重懸于(yu)0.5 mL PI/RNase 染色(se)液(ye)（貨(huo)號(hao)：550825）。
2) 對于7-AAD染(ran)(ran)色，將細胞重懸(xuan)于0.1 mL 染(ran)(ran)色液（貨號(hao)：554656），同時加入20 μL7-AAD染(ran)(ran)色液（貨號(hao)：559925）
6. 室溫(wen)避光(guang)孵育15分鐘。
7. 分析前4℃避光(guang)保(bao)存樣本。1小時之內上流式細胞儀檢測。
樣(yang)本制備注意事項：
? 獲得單(dan)個細胞，盡量避免(mian)DNA的(de)降(jiang)解(jie)
? 樣本最關鍵的就是減(jian)少(shao)碎片（EDTA/不可過(guo)度吹打/離(li)心rpm）
? PI既能與(yu)(yu)DNA結合(he)，又(you)能與(yu)(yu)RNA結合(he)，所以要用RNase降(jiang)解(jie)
? PI質(zhi)量及RNase所(suo)加量很(hen)重要(yao)，建(jian)議用(yong)商品化試(shi)劑
? 污染脫(tuo)氧核糖核酸酶會降解(jie)DNA，故玻璃器皿和(he)試劑要(yao)干凈滅菌(jun)
樣本檢測注意事項：
? 進(jin)樣速(su)度(du)：一般檢測細胞濃度(du)調整為2E5–2E6/ml，進(jin)樣速(su)度(du)為低速(su)。若峰形較(jiao)寬，可能就是進(jin)樣速(su)度(du)太快
? 儀器(qi)質控定期做(zuo)，盡可能排除(chu)因(yin)機器(qi)設置引起的峰形(xing)加(jia)寬
? 排(pai)除(chu)粘連細胞（FL2-A/FL2-W）
? 通(tong)過電壓(ya)脈沖信號的(de)寬度和面積區別(bie)實(shi)體組織標本(ben)中(zhong)的(de)粘(zhan)連(lian)細胞群體，最大程度的(de)減少粘(zhan)連(lian)細胞帶來的(de)假陽性結(jie)果
