概述
BE-TRANSFLOW是一(yi)種用于仿(fang)生條件(jian)下(xia)細胞培養的多功(gong)能微(wei)流(liu)控芯(xin)片(pian)(pian)。它(ta)允許2D-3D組織培養與(yu)建立流(liu)動和氣液(ye)界面 (ALI)的可能性相結(jie)合(he)。仿(fang)生學微(wei)型芯(xin)片(pian)(pian)在體外(wai)復(fu)制不同的組織 結(jie)構。 典型應用實例(li)有免疫(yi)系統體外(wai)模(mo)型、腫瘤轉移(yi)體外(wai)模(mo)型、 皮膚和腸道芯(xin)片(pian)(pian)模(mo)型。
材質(zhi)
BE-TRANSFLOW芯片(pian)由生物相容性材料制(zhi)成，且氣(qi)體不滲(shen)透(tou)，可以有效地梯度(du)控制(zhi)CO2、O2等。具(ju)有良好的光學性能， 具(ju)有高(gao)透(tou)明度(du)和低自熒光。
技(ji)術特點(dian)
BE-TRANSFLOW芯片包含兩個獨(du)立的孔，孔底為多(duo)孔膜。 多(duo)孔膜與底層通道相連。帶(dai)有(you)螺(luo)旋狀的進(jin)口(kou)和出口(kou)儲(chu)(chu)液(ye)池，用(yong) 于連接接頭(tou)和毛細管路(lu)。防蒸發儲(chu)(chu)液(ye)池位(wei)于培(pei)養液(ye)儲(chu)(chu)液(ye)池旁邊(bian)， 培(pei)養期(qi)間，毛細管封閉系統之前，將PBS或水(shui)灌滿防蒸發儲(chu)(chu)液(ye)池。
產品經過消毒(du)(每盒10片(pian))。常溫(15-25℃)下，避免(mian)陽光直射，干(gan)燥處(chu)存放。
細胞培養涂層(ceng)
BE-TRANSFLOW芯片(pian)經過處理，表面親水，便于用水溶液(ye)和/或凝(ning)膠填充(chong)，以促進細胞粘附。
如(ru)果需要(yao)特定包被涂層，根據廠家的說明準備涂層溶液(ye)(Collagen I, Collagen IV, Fibronectin, Poly-L-Lysine, Poly-D-Lysine…)并應用到每個通道(dao)。 吸出涂層溶液(ye)，使用通道(dao)體(ti)積5-10倍的蒸餾水或PBS洗滌，去除多余的涂 層溶液(ye)。
填充(chong)和(he)處理 1. 對(dui)細胞(bao)進行(xing)胰蛋(dan)白酶(mei)裂解和(he)計數(shu)。細胞(bao)濃(nong)度隨細胞(bao)類(lei)型而(er)變化。
建議在2-3天內接種(zhong)(zhong)細(xi)(xi)(xi)胞以獲得融合層。 2. 接種(zhong)(zhong)細(xi)(xi)(xi)胞。支持(chi)單分子層、水(shui)(shui)凝膠或(huo)兩者同時接種(zhong)(zhong)。 2A. 在膜(mo)(mo)上方的通(tong)(tong)道(dao)(dao)中(zhong)(zhong)接種(zhong)(zhong)細(xi)(xi)(xi)胞。 2B. 在膜(mo)(mo)下(xia)接種(zhong)(zhong)單層細(xi)(xi)(xi)胞。將(jiang)下(xia)層通(tong)(tong)道(dao)(dao)填滿細(xi)(xi)(xi)胞，并(bing)將(jiang)其翻轉， 促進(jin)細(xi)(xi)(xi)胞附著。如果進(jin)行此實(shi)驗(yan)驗(yan)，首先在底層通(tong)(tong)道(dao)(dao)中(zhong)(zhong)接種(zhong)(zhong)細(xi)(xi)(xi)胞， 當細(xi)(xi)(xi)胞成(cheng)功附著后，翻轉芯片并(bing)繼續按照協議在上面的通(tong)(tong)道(dao)(dao)中(zhong)(zhong)接 種(zhong)(zhong)細(xi)(xi)(xi)胞。 用(yong)P-100或(huo)P-1000移液(ye)管取100 μL帶細(xi)(xi)(xi)胞的培(pei)養液(ye)，加到(dao)進(jin)樣口(kou)。 培(pei)養液(ye)通(tong)(tong)過(guo)通(tong)(tong)道(dao)(dao)流到(dao)出口(kou)。注意將(jiang)進(jin)口(kou)(1)填滿，出口(kou)(2)空出，壓 力(li)差(cha)將(jiang)平衡進(jin)口(kou)和出口(kou)之間(jian)的培(pei)養液(ye)。在防蒸發儲液(ye)池中(zhong)(zhong)加水(shui)(shui)或(huo) PBS以避(bi)免蒸發。
3. 細(xi)胞粘附于表面(時間(jian)因細(xi)胞類(lei)型而異)。 4. 如果不(bu)連接(jie)流(liu)體控制系統，請(qing)在(zai)培(pei)(pei)養(yang)液(ye)(ye)儲(chu)液(ye)(ye)池中(zhong)(zhong)添加所需的培(pei)(pei)養(yang) 液(ye)(ye)。為此，在(zai)進(jin)口旁邊的培(pei)(pei)養(yang)液(ye)(ye)儲(chu)液(ye)(ye)池中(zhong)(zhong)小心(xin)地添加培(pei)(pei)養(yang)液(ye)(ye)，壓 力差將(jiang)平衡進(jin)口和(he)(he)(he)出(chu)口之間(jian)的培(pei)(pei)養(yang)液(ye)(ye)。 5. 如果連接(jie)流(liu)體控制系統，將(jiang)接(jie)頭接(jie)在(zai)出(chu)口和(he)(he)(he)進(jin)口(按此順序)。入 口和(he)(he)(he)出(chu)口設(she)計為標準連接(jie)(UNF 1/4”- 28)。請(qing)記住，在(zai)連接(jie)設(she)備(bei)和(he)(he)(he) 毛細(xi)管之前，須先(xian)將(jiang)儲(chu)液(ye)(ye)池填充。 也可以用(yong)搖床把介質(zhi)從一(yi)個儲(chu)液(ye)(ye)池移到另(ling)一(yi)個儲(chu)液(ye)(ye)池。當每(mei)個儲(chu)液(ye)(ye)池 的最終(zhong)體積為100 μl時，可以施(shi)加45°傾角。
流體控制系統的配置
Beonchip對流體(ti)控制系統的(de)配置(zhi)提出了一(yi)些建議。 前處理: 1. 在(zai)(zai)培養箱中(zhong)預熱毛細管和流體(ti)控制元件(jian)15-20分鐘。 2. 將系統放置(zhi)在(zai)(zai)超凈臺中(zhong)。 3. 在(zai)(zai)安裝流體(ti)控制系統之前，細胞須良好地粘附在(zai)(zai)表(biao)面。
4. 芯片內部或入(ru)(ru)口(kou)(kou)(kou)/出(chu)(chu)口(kou)(kou)(kou)需要填充滿培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液。 組裝流體控制(zhi)系(xi)統(tong)，需考慮以(yi)下(xia)事項: 1. 將入(ru)(ru)口(kou)(kou)(kou)完全(quan)填滿培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液，防止(zhi)有氣(qi)泡殘留。 2. 在組裝系(xi)統(tong)之(zhi)前，先將連(lian)接(jie)(jie)到入(ru)(ru)口(kou)(kou)(kou)的毛(mao)細(xi)管(guan)(guan)(guan)準(zhun)備好。 3. 入(ru)(ru)口(kou)(kou)(kou)和出(chu)(chu)口(kou)(kou)(kou)都連(lian)接(jie)(jie)標(biao)準(zhun)接(jie)(jie)頭(tou)(UNF 1/4”- 28)。當系(xi)統(tong)準(zhun)備好，將接(jie)(jie) 頭(tou)連(lian)接(jie)(jie)在進口(kou)(kou)(kou)。過程中(zhong)須非(fei)常(chang)小(xiao)心，以(yi)確保沒(mei)有氣(qi)泡進入(ru)(ru)系(xi)統(tong)。 4. 將毛(mao)細(xi)管(guan)(guan)(guan)連(lian)接(jie)(jie)到出(chu)(chu)口(kou)(kou)(kou)，封閉系(xi)統(tong)。 5. 檢查(cha)系(xi)統(tong)是否有泄漏。在將系(xi)統(tong)放入(ru)(ru)生物反應(ying)柜或培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)箱(xiang)之(zhi)前， 讓泵運(yun)行幾(ji)分鐘。 注意：為(wei)防止(zhi)過程中(zhong)產生氣(qi)泡，請避免將移(yi)液管(guan)(guan)(guan)尖端完全(quan)倒(dao)空。當從吸液口(kou)(kou)(kou)移(yi)開 移(yi)液管(guan)(guan)(guan)時，緊(jin)緊(jin)握住柱塞，以(yi)免負(fu)壓將溶液吸走。 細(xi)胞接(jie)(jie)種(zhong) 下(xia)面是應(ying)用實例，以(yi)便更(geng)好地(di)理解該芯片。 芯片可以(yi)進行單培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)或共培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)。在膜(mo)上和/或下(xia)接(jie)(jie)種(zhong)不同類(lei)型的細(xi)胞 單分子層(1和2)。為(wei)了(le)更(geng)實際的分析(xi)，可以(yi)在膜(mo)上添加水(shui)凝(ning)膠細(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)物 (3)。
細胞顯微觀察的準(zhun)備
可(ke)監測(ce)固定的(de)或(huo)活(huo)的(de)細(xi)胞和化學梯度。傳統細(xi)胞培(pei)養中(zhong)使(shi)用(yong)的(de)大(da)多數 監測(ce)系統都可(ke)以用(yong)于BEONCHIP微流控(kong)芯片。常用(yong)的(de)固定物也可(ke)用(yong)。細(xi)胞活(huo)力可(ke)以用(yong)不同的(de)染(ran)料來(lai)評估。此外，免疫熒(ying)光染(ran)色(se)可(ke)識(shi)別特(te)異性(xing)靶點。 細(xi)胞周期熒(ying)光記錄儀(yi)也可(ke)以使(shi)用(yong)。
